Нормальная длительность кровотечения. Анализ на длительность кровотечения как называется. В целом, нормы мало отличаются

Свертываемость крови у детей поддерживается в норме «факторами свертывания». Этих факторов очень много и функции их различны, факторы свертывания могут повышаться или понижаться, и то и другое отклонение от нормы – плохо. О расшифровке показателей коагулограммы у детей рассказывает врач педиатр – Юрий Стрелковский , а в конце статьи вас ждет интересный фильм о носителях «голубой крови» (о последнем наследнике российской короны – царевиче Алексее, у которого была пониженная коагуляция крови – гемофилия).

Основные показатели свёртываемости крови и особенности их у детей

Главным анализом, определяющим состояние крови и способность её к образованию тромбов, является коагулограмма. Этот анализ может включать в себя внушительное количество показателей, но в основном определяются только необходимые для врача результаты.

В большинстве случаев свертываемость определяется при необходимости оперативных вмешательств. Для этого исследуются уровень тромбоцитов, определяется длительность кровотечения и время свёртывания.

Уровень тромбоцитов в общем анализе крови

Определение количества тромбоцитов является наиболее лёгким и самым частым показателем свертываемости. У детей, норма тромбоцитов колеблется от 100-420·10⁹/л.

• период новорожденности 100-420·10⁹/л;
• от 1 месяца и до года 150-350·10⁹/л;
• после года 180-320·10⁹/л.

Когда тромбоциты опускаются ниже 100·10⁹/л, возникает угроза кровотечений, а при уровне в 50·10⁹/л, нужно быть крайне осторожным, так как при небольшой травме остановить кровь крайне тяжело и без переливания тромбоцитарной массы практически невозможно.

Длительность кровотечения и время свёртываемости

Также довольно простые и информативные методы определения свёртываемости крови у детей.

• норма длительности кровотечения у ребёнка составляет 2-4 минуты;
• время свертываемости показывает за сколько образуется кровяной сгусток, оно колеблется в пределах 2-5 минут.

Если вышеперечисленные факторы выходят за пределы нормы, то необходимо дополнительное исследование остальных показателей свёртываемости крови.

Протромбиновое время и протромбиновый индекс

Данный показатель характеризует начальные фазы свертываемости, и позволяет выявить гемофилию, ДВС синдром. Нормы у ребёнка:

• новорожденные 14-18 сек;
• дети до 6 лет 13-16 сек;
• 7-12 лет 12-16 сек;
• Старше 12 лет 11-15 сек.

Протромбиновый индекс представляет собой соотношение идеального протромбинового времени и результата пациента в процентах, норма которого вне зависимости от возраста ребенка составляет 70-100%.

Тромбиновое время

Раскрывает последнюю стадию свёртываемости крови – реакцию между фибриногеном и тромбином. Норма составляет 25-31 сек.

Уровень фибриногена

Белок фибриноген, образующийся в печени, является первым фактором свёртывания крови. Норма у ребенка:

• Дети до года 1,25-3 г/л;
• Старше года 2-4 г/л.

Снижение его уровня может возникать при патологиях печени, злокачественных заболеваниях крови, приёме некоторых препаратов. А повышение количества фибриногена происходит при воспалительных процессах и стрессе.

Активированное частичное тромбиновое время

АЧТВ один из наиболее значимых показателей коагулограммы, который расскажет, насколько быстро может образоваться фибриновый сгусток. В зависимости от лаборатории и используемых реактивов норма может отличаться и должна уточняться непосредственно там.

Антитромбин III

Физиологический антикоагулянт, угнетающий некоторые факторы свёртываемости и тромбин. Норма у ребенка:

• до года 45-80%
• до 10 лет 65-100%
• до 16 лет 80-100%
• старше 16 лет 75-125%

Повышение его уровня происходит при тяжёлых воспалительных заболеваниях, недостатке витамина К, а также при лечении гормональными противовоспалительными препаратами.

У детей (как и у взрослых) бывают нарушения свертывания, которые проявляются:

• склонностью к кровотечениям (кровь недостаточно свертывается). Самая знаменитая болезнь – гемофилия, которую называют «ЦАРСКОЙ БОЛЕЗНЬЮ». Смотрите видео в конце статьи о царской болезни – гемофилии в семье русского царя.
• склонностью к тромбозам (свертываемость крови больше, чем надо)

Оба состояния в некоторых случаях угрожают жизни. Как правило, нарушения свертывания передаются по наследству.

Болезни, связанные с недостаточной свертываемостью, в легких случаях у мальчиков проявляется синяками, носовыми кровотечениями. У девочек могут быть очень обильные менструальные кровотечения.

Склонность к тромбозам может проявиться нарушением мозгового кровообращения у детей. Да, да, у детей, как и стариков, иногда бывают инсульты и тромбоэмболии.

Наиболее частые патологии, при которых свертываемость меньше нормы

Существует ряд заболеваний, приводящих к нарушению свертываемости. В основной массе это наследственные заболевания, за ними по численности идут аутоиммунные болезни, а также сильные воспалительные процессы печени.

Гемофилия А, В и С

Лидирующее место в мире занимает гемофилия. Это наследственное заболевание, которое характеризуется дефицитом VIII, IX, XI факторов свертывания. В результате чего могут снизиться практически все показатели коагулограммы. Заболевание наследственное и болеют им преимущественно лица мужского пола

Болезнь Виллебранда проявляется менее опасной кровоточивостью, чем гемофилия, иногда это заболевание называют «псевдогемофилия» и сосудистая гемофилия. Встречается у 1 из 10000 новорожденных. Болеют как мальчики, так и девочки, болезнь проявляется кровотечениями из носа, десен, у 65% девочек болезнь проявляется маточными кровотечениями в подростковом возрасте.

Тромбоцитопения

Чаще всего возникает при аллергических реакциях, приёме нестероидных противовоспалительных препаратов, аутоиммунных заболеваниях, химиотерапии.

Передозировка лекарственными препаратами

Наиболее частой причиной нарушения свертываемости крови является передозировка парацетамолом и ацетилсалициловой кислотой. При этом падает уровень тромбоцитов и возникают подкожные кровоизлияния, желудочные кровотечения, если не прекратить приём препарата, то возможны кровоизлияния в мозг.

Заболевания печени

Острые и хронические гепатиты, а также циррозы приводят к нарушению выработки некоторых факторов свертывания и в результате возникают кровотечения.

ДВС синдром

Наиболее опасное состояние, которое характеризуется снижением всех факторов свёртывания вплоть до их полного отсутствия. Развивается при тяжёлых бактериальных инфекциях, в большинстве случаев является осложнением сепсиса, тяжёлых травм и ожогов.

Наследственные нарушения свертывания, которые проявляются склонностью к тромбозам

Антифосфолипидный синдром : в крови детей обнаруживают антифосфолипидные антитела, волчаночный антикоагулянт. Болезнь проявляется эпизодами тромбоэмболий. Незавидна судьба девочек при этом синдроме. Им редко удается стать матерью. Молодые женщины с антифосфолипидным синдромом страдают хроническим невынашиванием.

Фактор Лейдена, дефицит Протеина C и S, дефицит антитромбина, мутации протромбина, гипергомоцистеинемия, повышенный уровень липопротеина, факторов VIII, XI все эти наследственные состояния (обозначенные общим названием – ТРОМБОФИЛИИ), могут привести к тромбозам. Правда у детей тромбозы встречаются гораздо реже, чем кровотечения. Для того чтобы у ребенка возник тромбоз, необходимы дополнительные условия – тяжелая болезнь, длительный постельный режим, внутривенные инъекции через венозный катетер и подобные условия.

Злокачественные заболевания крови, лейкоз, нефротический синдром часто осложняются тромбоэмболиям.

Если в семье кто-то из родственников умер от тромбоза, то не исключено, что и ребенок может иметь наследственные патологические гены.

В целом, в последние десятилетия частота тромбозов среди детей растет, это связано и с изменением питания, и с малой подвижностью современных детей.

Своевременное исследование крови на свертываемость помогает выявить скрытые формы заболеваний и предпринять их раннее лечение.

Свертываемость крови обусловлена белком под названием фибрин. Его деятельность заключается в формировании тромбов и сгущении крови. Коагуляция очень важна для нормальной работы всего организма, поскольку именно она позволяет избежать потери жидкости и форменных элементов при различного рода повреждениях. Если анализ крови на свертываемость и длительность кровотечения показал какие-либо отклонения, то врачам необходимо как можно быстрее установить причину этой ситуации, так как последствия бывают различные, вплоть до летального исхода. Этим обусловлена потребность контроля свертывающей функции крови, а также наблюдение за сосудами. Нормальной длительностью кровотечения считается 2-3 минуты после выполнения забора биологической жидкости для анализа.

Для чего знать время свертываемости

Время свертываемости описывает несколько функций системы гемостаза – насколько быстро образуются тромбы, способность тромбоцитов прилипать друг к другу, а также дает информацию врачу о том, за какое время при нарушении целостности сосудистых стенок организмом будет заделана течь. За это время фибриноген превращается в фибрин, формируя «пробку», что препятствует большим потерям биологической жидкости.

Исследование длительности кровотечения, анализ на развернутую коагулограмму выполняют при:

• предродовом периоде, поскольку возможны осложнения.
• перед выполнением средних и больших оперативных вмешательств.
• хронических кровопотерях по причине таких патологий, как геморрой, синдром Малори-Вейсса, эрозиях органов пищеварения, предраковых и раковых состояниях.
• тромботических нарушениях, в том числе при варикозном расширении вен.
• аутоиммунных состояниях.

Снижение свертываемости крови обуславливает риск длительных кровопотерь во время хирургических операций или по причине травм. Потеря большого количества форменных элементов и плазмы грозит организму и его жизнедеятельности. Особую группу риска формируют женщины в послеродовом периоде, во время месячных.

Другой таковой группой являются мужчины с таким заболеванием, как гемофилия, которая подразумевает отсутствие некоторых белков, которые обуславливают гемостаз. При этом представительницы слабого пола являются лишь переносчиками генов этой патологии. Снижение коагуляции также встречается на фоне сахарного диабета или регулярного приема антиагрегантов, антикоагулянтов.

Важно понимать, что гиперкоагуляция также не считается вариантом нормы, поскольку высока вероятность развития так называемых сосудистых катастроф – тромбозов любой локализации, в том числе инфарктов и ишемических инсультов. Это связано с формированием сгустков внутри сосудистого русла, которые закупоривают ток крови по сосудам, из-за чего развивается некроз ткани, которая питалась этой магистралью.

Другими результатами гиперкоагуляции являются варикозная болезнь, развитие геморроя и другие заболевания. Формирование повышенной свертываемости обусловлена обезвоживанием, патологиями почек, печени, а у женщин она иногда отмечается на фоне приема оральных гормональных противозачаточных средств.

Длительность кровотечения в норме

Показатель свертываемости крови у женщин и мужчин одного возраста обычно одинаковый. Исключение составляет лишь период беременности. Но у детей и пожилых лиц он несколько разнится в виду гормональных перестроек. Вынашивание малыша отличается тем, что свертывание становится более активным, поскольку система гемостаза здесь отвечает сразу за два организма и должна более активно реагировать на возникшие проблемы.

У деток первого года жизни свертываемость крови также другая, а у новорожденных ПТВ растет на 2-3 секунды. У недоношенных малышей протромбиновое время также не несколько секунд выше.

Основными компонентами коагулограммы считаются такие показатели.

1. Количество тромбоцитов, которое не должно опускаться менее 150 г/л. У взрослого человека верхняя граница нормы составляет 380 г/л, у малышей – 320-350.
2. Время свертываемости по Сухареву подразумевает забор крови из пальца. Начало этого процесса наступает по истечении 30-150 секунд, максимальная допустимая длительность 6 минут, однако за норму врачи считают 5 минут, то есть 300 секунд.
3. Анализ по Ли-Уайту подразумевает изучение этого показателя по венозной крови. Сколько она будет останавливаться – зависит от индивидуальных особенностей организма, но нормальной величиной считается 5-10 минут.
4. Также забор из пальца осуществляется при определении времени по Дуке, патологией является время от 4 минут.
5. Забор биологического тестируемого материала из вены необходим для изучения тромбинового времени, допустимые границы – 15-20 секунд.
6. Протромбиновый индекс можно определить и по капиллярной, и по венозной крови. В первом случае целевые значения составляют 90-105%, а во втором – 93-107%.
7. АЧТВ – активированное частичное тромбопластиновое время. Допустимые цифры – 30-50 секунд.
8. Фибриноген – белок, из которого образуется фибрин. У деток первых дней жизни его количество составляет 1.5-3 г/л, а у взрослых – 2-4 г/л.

Время коагуляции по Сухареву

Забор крови осуществляют из пальца, лучше всего производить его натощак или спустя несколько часов после приема пищи. Каких-либо особых рекомендаций по подготовке пациента к этому тесту нет. Важно лишь то, чтобы это была именно капиллярная кровь. Время коагуляции по Сухареву не отображает активность тромбоцитов в крови или за сколько секунд венозная кровь свернется.

Первая полученная капля удаляется тампоном, после чего лаборант ждет появления следующей, которую необходимо поместить в специальную колбу. Ее качают поочередно в обе стороны. Этот процесс засекается секундомером. Как только биологическая жидкость застынет, часы останавливают, а период от старта до финиша является время свертываемости. Обычно оно занимает от 30 до 120 секунд в норме.

С момента формирования фибрина до окончания самого свертывания не должно пройти более 5 минут. Эта методика позволяет определить этап формирования фибрина из фибриногена, когда он перестает быть растворимым.

Метод Моравица

Эта методика определения коагуляции крови применяется достаточно широко и сегодня, при этом она очень легкая. Забор крови по Моравицу производят натощак, подготовка требует исключения употребления спиртных напитков за 2-3 суток до проведения теста. Также не рекомендовано курить, пить кофе в день проведения анализа. Врачи советуют пить только воду, что повышает точность и эффективность исследования.

На предметное стекло лаборант помещают каплю крови, которая была взята из пальца. Затем запускается секундомер. Каждые 30 секунд в эту каплю помещают стеклянную трубку. Как только за ней будет видна нить фибрина, измерение останавливается, а полученное время является результатом анализа по Моравицу. Норма находится в диапазоне 3-5 минут.

Метод свертываемости по Дуке

Эта методика, изучающая гемостаз, также требует проведения забора крови натощак, желательно в утренние часы. Пациенту прокалывают мочку уха при помощи специальной иглы, которая называется игла Франка. Каждые 15 секунд к месту прокола прикладывается бумага. Как только на ней больше не остается следов крови, тестирование завершается. Нормальные показатели подразумевают остановку кровотечения за счет формирования нитей фибрина, сгустков и тромбов за 1-3 минуты.

Свертываемость по Ли-Уайту

Методика оценки показателей системы гемостаза по Ли-Уайту подразумевает время, за которое свернется венозная кровь в пробирке. Здесь нет необходимости брать у пациента капиллярную кровь из пальца.

Целью этого анализа является максимально точное определение первой стадии свертывания, когда формируется протромбиназа. Этот момент играет очень большую роль и важен для врачей, поскольку он зависим от нескольких факторов, среди которых:

• проницаемость стенки сосуда;
• количество плазменных белков;
• уровень тромбоцитов и других форменных элементов, которые способны к агрегации.

Соотношение вышеуказанных компонентов считается ключевым звеном гемостаза для здорового человека. Время свертываемости по Ли-Уайту иногда может отличаться. Это обусловлено условиями и техники выполнения процедуры. В обычной лабораторной стеклянной пробирке оно составляет 4-7 минут, а из-за того, что другие материалы имеют иные физические свойства, длительность тест в них растет до 15-25 минут. Повышение свертываемости укажет на наличие чрезмерной активности первого звена гемостаза.

Основные причины отклонения от нормы

Изменение показателей времени свертываемости крови говорит о развитии различных патологических процессов в организме. Наиболее часто причины повышенного результата анализа системы гемостаза свидетельствуют о таких патологиях.

1. Заболеваниях печени, особенно стадии декомпенсации цирроза, гепатита, онкологических состояний, когда паренхима органа оценивается как несостоятельная.
2. Дефиците факторов свертывания, либо же об их неполноценности, что приводит к тому, что нормальных белков содержится пониженное количество и для обеспечения нормальной коагуляции их попросту не хватает.
3. Терминальные стадии синдрома диссеминированного внутрисосудистого свертывания.

Удлинение показателя также отмечается тогда, когда пациент находится на приеме антикоагулянтов и антиагрегантов, гепаринотерапии. Это обуславливает необходимость проведение анализов им чаще, чем здоровым людям. Например, при регулярном употреблении варфарина, требуется ежемесячный контроль МНО.

Укорочение показателей гемостаза отмечается при следующих патологиях.

1. Начальных этапах синдрома диссеминированного внутрисосудистого свертывания, эта стадия называется гиперкоагуляцией.
2. Заболеваниях, которые отмечаются повышенным риском тромбоза – гипертоническая болезнь, атеросклероз, дислипидемия с повышением показателей холестерина, различные тромбозы, тромбофилии, варикозная болезнь.
3. Длительном приеме оральных гормональных противозачаточных средств.
4. Наличии таких вредных привычек, как табакокурение и употребление алкоголя.
5. Обезвоживании.
6. На фоне длительного приема кортикостероидов, которые способны влиять абсолютно на все протекающие в организме процессы.

Важно понимать, что лабораторные условия несколько отличаются от таковых внутри замкнутой системы организма, поскольку при определении состояния системы гемостаза одномоментно оценивается лишь один показатель, в то время как внутри гомеостаза организма на свертываемость влияют сразу все факторы. Это обуславливает необходимость изучения сразу нескольких показателей для оценки общей картины.

Кровь состоит из клеток (элементов- лейкоциты, эритроциты, тромбоциты и т.п.) и плазмы. Кровь циркулирует по сосудам всего организма и проникает во все органы и ткани, доставляя к ним питательные вещества и кислород, регулирует водно-солевой обмен, участвует в регуляции кислотно-щелочного равновесия, поддерживает постоянную температуру тела, выполняет функцию защиты (присутствие антител).

Для чего нужен анализ крови?

Анализ показателей крови наиболее важен, так как у здорового человека эти показатели относительно постоянны, любое их изменение – показатель изменения и в организме человека.

Как правильно сдать анализ крови?

Для анализов используют, как правило, кровь из вены. Забор крови происходит утром и натощак. Если необходимо в другое время – нужно воздержаться от приёма пищи в течение 3 часов. Сок, чай, кофе (тем более с сахаром) - не допустимы. Можно пить воду.

Что покажет общий клинический анализ крови?

Общий анализ крови содержит информацию о количестве таких показателей, как: эритроциты, тромбоциты, лейкоциты (и их виды), содержании гемоглобина, цветном показателе.

Показатели общего анализа крови.

Гемоглобин.

Множество заболеваний крови (в том числе и наследственные) тесно связаны с нарушением строения гемоглобина. Гемоглобин – красный пигмент крови, выполняет перенос кислорода к тканям.

Норма гемоглобина:

• Норма гемоглобина для мужчин: 130,0 - 160,0 г/л
• Норма гемоглобина для женщин: 120,0 - 140,0 г/л

О чем говорит изменение нормы гемоглобина?

Снижение нормы гемоглобина наблюдают при различных анемиях, при потере крови. Повышение нормы наблюдают при уменьшении \ увеличении числа эритроцитов, если кровь сгущается.

Эритроциты.

Эритроциты- клетки крови, которые образуются в костном мозге и содержат гемоглобин.

Норма эритроцитов:

• Норма эритроцитов для мужчин: 4,0 - 5,0*1012/л крови
• Норма эритроцитов для женщин: 3,9 - 4,7*1012/л крови

О чем говорит изменение нормы эритроцитов?

Снижение количества эритроцитов наблюдают при снижении функции костного мозга, при изменениях в костном мозге (лейкозы, злокачественные опухоли и т.п.), при нехватке в организме железа, нехватки витамина B12, при кровотечениях.

Скорость оседания эритроцитов (СОЭ).

Этот показатель выражают в миллиметрах плазмы, которая отслаивается в течение часа.

Норма СОЭ:

• Норма СОЭ для мужчин: 2-15 мм/ч
• Норма СОЭ для женщин: до 10 мм/ч

О чем говорит изменение нормы СОЭ?

Изменение скорости оседания эритроцитов не является знаком для какого-то конкретного заболевания. Но, при этом ускорение СОЭ указывает на то, что есть патологический процесс.

Тромбоциты.

Тромбоциты- это клетки крови, которые содержат ядро. Тромбоциты участвуют в свертываемости крови.

Норма тромбоцитов.

В 1 л крови -180-320*109 тромбоцитов. Резкое уменьшение наблюдают, например, при болезни Верльгофа, при симптоматическом недостатке тромбов.

Лейкоциты.

Лейкоциты- бесцветные клетки, которые поглощают бактерии и отмершие клетки и вырабатывают антитела.

Норма лейкоцитов.

Среднее количество лейкоцитов колеблется от 4*109 до 9*109 в 1 л крови. Увеличение числа лейкоцитов может говорить о некоторых инфекциях, болезнях крови, воспалениях, злокачественных образованиях, интоксикации, аллергии, кислородном голодании. Уменьшение числа лейкоцитов можно наблюдать при лучевом поражении, контакте с химическими веществами, при приеме медикаментозных препаратов, при вирусных бактериальных инфекциях, при заболевании системы крови.

Показатели свертывания крови.

Время свертывания -момент от контакта крови с чужеродной поверхностью до формирования сгустка. Время свёртывания крови (по Сухареву) в норме: 2-5 мин.
Если время свёртывания дольше: значительный дефицит плазменных факторов, наследственная коагулопатия, нарушения образования фибриногена, заболевания печени, лечение гепарином.
Если время свёртывания меньше: гиперкоагуляция после кровотечений, послеоперационный и послеродовой периоды, I стадия ДВС-синдрома, побочное действие контрацептивов.

Время кровотечения - его длительность.
Норма времени кровотечения по Дьюку не превышает 4 мин.
Увеличение времени кровотечения наблюдают при выраженных тромбоцитопениях или/и тяжелых нарушениях их функции (тромбоцитопатиях). Нужно помнить, что у 60% с этой патологией тест отрицательный, и время кровотечения нормально.

Биохимический анализ крови.

При множестве заболеваний- главный для постановки правильного диагноза. Это такие заболевания, как: болезни поджелудочной железы, острые заболевания печени, заболевания почек, сердца, множество наследственных заболеваний, авитаминоз, интоксикация и др.

Снижение белка - белковое голодание, угнетение процессов синтеза белков, при хронических заболеваниях, воспалениях, злокачественных образованиях, интоксикации и др.

Повышение количества липидов и их фракций: при нарушении жирового обмена, при нарушении функциональных способностей печени и почек.

Резкое возрастание концентрации прямого билирубина - характерный признак большинства заболеваний печени, при желтухе. При гемолитической желтухе в крови растет концентрация непрямого билирубина.

Принцип. Определяется длительность кровотечения из капилляров после прокола кожи скарификатором.

Ход работы. Определение может проводиться при проколе пальца или мочки уха. Глубина прокола должна быть не менее 3мм – только при этом условии кровь из ранки выделяется самопроизвольно, без нажима. Сразу после прокола включают секундомер. Первую каплю крови не удаляют ватой, как обычно, а прикасаются к ней фильтровальной бумагой, которая впитывает кровь. Далее снимают фильтровальной бумагой выступающие капли крови через каждые 30 секунд. Постепенно капли крови становятся все меньше. Когда следы крови перестанут оставаться, секундомер выключают.

Источники ошибок: недостаточно глубокий прокол, поспешное снятие капель крови, прикосновение фильтровальной бумагой к коже, что способствует остановке кровотечения.

Нормальные величины. Длительность кровотечения по Дуке составляет 2-4 минуты.

Диагностическое значение. Практическое значение имеет удлинение времени кровотечения, что наблюдается при тромбоцитопениях, заболеваниях печени, недостаточности витамина С, злокачественных опухолях и др. При гемофилии этот тест остается в пределах нормы.

Определение времени свертывания капиллярной крови (по Сухареву)

Принцип. Определяется время образования сгустка крови в капилляре Панченкова.

Ход работы. Прокалывают кожу, удаляют первую каплю крови. Набирают самотеком кровь в чистый сухой капилляр Панченкова до метки «70-75» (25-30делений) без пузырьков воздуха и включают секундомер. Наклоном капилляра перемещают кровь на середину трубки. Через каждые 30 секунд наклоняют капилляр поочередно вправо и влево под углом 45 градусов. При этом капилляр необходимо плотно держать в руке, чтобы сохранить более высокую и постоянную температуру свертывающейся крови. В начале исследования кровь свободно перемещается внутри капилляра, а затем ее движение замедляется и появляется «хвостик» из нитей фибрина – это говорит о начале свертывания крови. При полном свертывании кровь перестает двигаться. Моменты начала и конца свертывания крови засекают по секундомеру.

Нормальные величины. Начало свертывания: 30 секунд – 2 минуты;конец свертывания: 3-5 минут.

Диагностическое значение. Удлинение времени свертывания крови наблюдается при тяжелой недостаточности факторов, участвующих во внутреннем пути образования протромбиназы, дефиците протромбина и фибриногена, а также при передозировке гепарина.

8.4. КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ПО ТЕМЕ «ГЕМОРРАГИЧЕСКИЕ ДИАТЕЗЫ»

1. Что обозначает термин «Геморрагические диатезы»?

2. На какие группы делятся геморрагические диатезы?

3. Как проводится лабораторная диагностика тромбоцитопении, тромбоцитопатии, коагулопатии, вазопатии?

4. Морфология тромбоцитов.

5. Функции тромбоцитов.

6. Методы подсчета количества тромбоцитов в крови.

7. Нормальное количество тромбоцитов в крови.

8. Причины тромбоцитопений и тромбоцитозов.

9. Какой механизм гемостаза характеризует длительность кровотечения и время свертывания капиллярной крови?

10. Длительность кровотечения в норме и при различных видах геморрагических диатезов.

11. Время свертывания капиллярной крови в норме и при тромбоцитопении, коагулопатиях, вазопатиях.

ГРУППЫ И РЕЗУС-ПРИНАДЛЕЖНОСТЬ КРОВИ

На поверхности клеток крови человека имеется большое количество структур, которые относятся к антигенам, то есть при попадании в организм другого человека стимулируют выработку антител. Их называют также изоантигенами [от греч. isos одинаковый], так как они встречаются у представителей одного вида, в отличие от гетероантигенов [от греч. heteros иной, другой], которые имеются у других видов млекопитающих.

Основатель науки о группах крови Карл Ландштейнер в 1901г. обнаружил различия в крови людей, которые впоследствии были обозначены как группы крови системы АВ0. Долгое время сведения о групповых различиях относились только к эритроцитам. Позднее стало известно, что такие различия присущи и другим компонентам крови: лейкоцитам, тромбоцитам, белкам плазмы. К настоящему времени открыто 26 систем антигенов эритроцитов (АВ0, Rh-резус, MNS, Kell, Lewis и др.), включающих 270 антигенов, системы антигенов лейкоцитов (HLA, NA, NB, NC), тромбоцитов (HPA) и 10 систем белков плазмы. С позиций современной имуногематологии, каждый человек имеет свою собственную уникальную группу крови - набор антигенов, которые могут явиться причиной иммунологической несовместимости при переливании крови и её компонентов, беременности, трансплантации органов.

Однако в практической медицине под группами крови традиционно понимают сочетания только антигенов эритроцитов системы АВ0, так как именно они в первую очередь определяют совместимость при переливании крови.

9.1. ГРУППЫ КРОВИ СИСТЕМЫ АВ0

Группа крови (в традиционном понимании) – это сочетание антигенов эритроцитов системы АВ0, которое генетически предопределено и не изменяется в течение жизни.

К системе групп крови АВ0 относятся два групповых антигена (агглютиногена) - А и В и два вида антител к ним, которые в настоящее время принято обозначать анти-А и анти-В антитела взамен использовавшихся ранее α- и β- изогемагглютининов.

Уникальность системы АВ0 состоит в том, что в плазме у неиммунных людей имеются естественные антитела к отсутствующему на эритроцитах антигену. Во всех других системах эритроцитарных антигенов антитела не являются врожденными и могут появиться только вследствие антигенной стимуляции (переливания крови, беременности).

Различные сочетания антигенов и антител системы АВ0 образуют 4 группы крови, которые по международной номенклатуре обозначаются буквами по названию имеющихся антигенов: 0, А, В и АВ.

Таблица 35

Группы крови системы АВ0

Чаще у людей бывает первая (35%) и вторая группа крови (35-40%), реже – третья (15-20%) и четвертая (5-10%) группы.

В большинстве случаев антиген А обладает большой антигенной силой, то есть дает с антителами анти-А выраженную реакцию агглютинации. У 3-5% людей со второй группой и у 25-30% людей с четвертой группой крови антиген А имеет слабые антигенные свойства. Его обозначают как антиген А 2 . Слабые виды антигена А дают с антителами анти-А слабую агглютинацию (мелкую, позднюю), что может привести к ошибкам при определении группы крови.

Антитела анти-А так же, как антиген А, могут быть представлены двумя разновидностями, различающимися по времени действия – анти-А 1 и анти-А 2 . Антитела анти-А 1 относятся к антителам быстрого действия, а анти-А 2 - замедленного действия. Поэтому при определении группы крови исследование необходимо проводить в течение 5 минут.

В сыворотке у многих новорожденных групповые антитела отсутствуют. Они появляются обычно в течение первых месяцев жизни, и титр их постепенно нарастает, достигая максимума в возрасте 10-20 лет. В старости и при иммунодефицитных состояниях титр антител может снижаться.

Клиническое значение групп крови очень велико, так как дает возможность без осложнений переливать кровь и её компоненты от одного человека (донора) другому человеку (реципиенту).

В настоящее время для переливания используют только компоненты крови. Цельную кровь переливают в исключительных случаях – по жизненным показаниям и при отсутствии необходимых гемокомпонентов. Чаще всего для трансфузий применяют эритроцитную массу и плазму, желательно той же группы крови, к которой относится реципиент. В случае необходимости и в небольших количествах (до 500мл) возможно переливание эритроцитной массы не одногруппной, а совместимой с реципиентом крови.

При переливании крови и эритроцитной массы неукоснительно придерживаются правила: эритроциты донора не должны содержать антигена, соответствующего антителам реципиента, так как в этом случае происходит агглютинация и массивный гемолиз введенных донорских эритроцитов - опасное для жизни гемотрансфузионное осложнение. Небольшое количество эритромассы 0(I) группы крови, эритроциты которой не содержат антигенов А и В, можно перелить реципиенту с любой группой крови, поэтому лиц с I группой крови называют «универсальные доноры». До 500 мл эритроцитной массы А(II) и В(III) групп крови можно перелить, кроме одногруппных, только лицам с АВ(IV) группой крови. Эритроцитная масса АВ(IV) группы крови даже в небольших количествах не может быть перелита ни одной группе, кроме IV, зато в нее можно перелить небольшое количество эритромассы всех групп. Поэтому лиц с АВ(IV) группой крови называют «универсальными реципиентами».

При переливании плазмы крови учитывают антитела донора. Плазма донора не должна содержать антител, направленных против антигенов реципиента. Плазма 0(I) группы крови содержит оба агглютинина – α и β и ее нельзя переливать ни в какую группу крови, кроме I. Небольшое количество плазмы II и III групп крови может быть перелито только в 0(I) и одноименные группы. Плазма АВ(IV) группы не содержит агглютининов и может быть перелита (в небольшом количестве) людям с любой группой крови.

9.1.2. Методы определения группы крови

Определение групп крови проводится в соответствии с приказом МЗ РФ №2 от 9.01.98 «Об утверждении инструкций по иммуносерологии».

В настоящее время для определения группы крови используются 2 группы методов.

1. Методы, в основе которых лежит реакция агглютинации:

Прямая реакция с поликлональными реагентами (стандартными изогемагглютинирующими сыворотками I-III групп) или с моноклональными реагентами (цоликлонами анти-А и анти-В);

Перекрестный метод.

2. Методы гелевой технологии (сочетание реакции агглютинации и гель-

фильтрации).

Определение группы крови системы АВ0 при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток

Принцип. Выявляют агглютиногены эритроцитов с помощью реакции агглютинации со стандартными сыворотками, содержащими агглютинины. По наличию или отсутствию агглютиногенов в исследуемых эритроцитах судят о групповой принадлежности крови.

Реагенты.

1. Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки 0(I), А(II) и В(III) групп двух разных серий каждой группы.

2. Стандартная изогемагглютинирующая сыворотка АВ(IV) группы.

3. Изотонический раствор хлорида натрия - 0,9% раствор NaCl.

Специальное оснащение:

Подготовительная работа. Определение групп крови должно производиться при хорошем освещении и при температуре 15-25ºС. Флаконы со стандартными сыворотками ставят в специальный штатив в следующем порядке: слева – стандартные сыворотки 0(I) группы (одна сзади другой), в середине – стандартные сыворотки А(II) группы и справа – стандартные сыворотки В(III) группы. Отдельно ставят стандартную сыворотку АВ(IV) группы крови, употребляемую в качестве дополнительного контроля. В каждый флакон со стандартной сывороткой опускают сухую чистую глазную пипетку. Для промывания стеклянных палочек в химический стаканчик наливают воду. В стаканчик с изотоническим раствором опускают глазную пипетку.

Техника определения группы крови при помощи стандартных сывороток. На верхней части пластинки пишут фамилию и инициалы человека, у которого определяют группу крови. Делят стеклографом пластинку на 6 частей: по 3 в 2 ряда. В левом столбце сверху подписывают анти-А+В; в среднем столбце – анти-В; в правом столбце – анти-А. Под соответствующими обозначениями на пластинку с помощью глазной пипетки наносят по одной большой капле (0,1мл) изогемагглютинирующей сыворотки 1-3 групп двух разных серий – всего 6 капель. Каждую пипетку сразу же опускают в тот же флакон с сывороткой, из которого она была взята. Кровь для исследования берут из пальца. Помещают одну каплю крови в лунку предметного стекла или на нижнюю часть пластинки. Наносят чистой сухой стеклянной палочкой маленькие капли крови рядом с каждой каплей стандартной сыворотки. При этом капли крови должны быть примерно в 10 раз меньше капель сывороток. Перемешивают капли стандартных сывороток с находящимися рядом каплями крови стеклянной палочкой. После размешивания каждой капли стеклянную палочку промывают в стаканчике с водой и насухо вытирают ватой или фильтровальной бумагой. Замечают время. В течение 3 минут периодически покачивают пластинку. Через 3 минуты в те капли, где наступила агглютинация, добавляют по 1 капле изотонического раствора NaCl и периодически покачивают пластинку еще в течение 2 минут. Через 5 минут после перемешивания капель оценивают результаты реакции.

Трактовка результатов реакции. Реакция агглютинация в каждой капле может быть положительной или отрицательной. При положительной реакции, то есть при наличии агглютинации, в смеси появляются видимые на глаз красные зерна склеенных эритроцитов. Сыворотка при этом полностью или частично обесцвечивается. При отрицательной реакции, то есть отсутствии агглютинации, жидкость остается равномерно окрашенной в красный цвет. Результаты реакций в каплях с сывороткой одной и той же группы должны совпадать. Если агглютинация наступила во всех каплях, то есть исследуемая кровь относится к АВ(IV) группе, то для исключения неспецифической агглютинации дополнительно проводят контрольное исследование со стандартной сывороткой АВ(IV) группы. Для этого на пластинку наносят 1 большую каплю стандартной сыворотки АВ(IV) группы и рядом с ней – маленькую каплю исследуемой крови. Сыворотку и кровь перемешивают и наблюдают за ходом реакции в течение 5 минут, периодически покачивая пластинку. Отсутствие агглютинации в этой капле подтверждает АВ(IV) группу исследуемой крови. Появление агглютинации с сывороткой АВ(IV) группы говорит о неспецифическом характере наблюдающейся агглютинации.

Таблица 36

Оценка результатов определения группы крови при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток

(-) отсутствие агглютинации

(+) наличие агглютинации.

Определение группы крови системы АВ0 с помощью цоликлонов анти-А и анти-В

Принцип. Такой же, как при определении групп крови со стандартными сыворотками – то есть выявление агглютиногенов в исследуемых эритроцитах с помощью агглютининов, содержащихся в цоликлонах анти-А и анти-В.

Реагенты: цоликлон анти-А (розового цвета) и цоликлон анти-В (голубого цвета).

Цоликлоны анти-А и анти-В содержат моноклональные антитела анти-А и анти-В (иммуноглобулины класса М) и не содержат антитела иной специфичности. Цоликлоны представляют собой разведенную асцитную жидкость мышей – носителей гибридом анти-А и анти-В.

Техника определения. Определение групп крови должно производиться при хорошем освещении и при температуре 15-25ºС. Определение может производиться в нативной крови с консервантом или в крови без консерванта, в том числе взятой из пальца. Размечают пластинку на 2 части. Левую часть пластинки подписывают «анти – А», правую – «анти – В». Наносят по одной большой (0,1мл) капле цоликлонов анти-А и анти-В под соответствующими обозначениями. Наносят по одной маленькой капле крови (в 10 раз меньшей, чем капли реагентов) рядом с каждой каплей цоликлона. Перемешивают капли крови с реагентом стеклянной палочкой, промывая после перемешивания палочку в воде и вытирая её насухо. Замечают время. Периодически покачивая пластинку, ждут 3 минуты. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3-6 секунд, но оценку результатов реакции ведут через 3 минуты, чтобы не пропустить позднюю агглютинацию со слабыми разновидностями антигена А или В.

Трактовка результатов. Результат реакции может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации эритроцитов, видной невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты не обнаруживаются.

Таблица 37

Оценка результатов определения группы крови системы АВ0

при помощи цоликлонов анти-А и анти-В

(-) – отсутствие агглютинации

(+) – наличие агглютинации.

Определение группы крови системы АВ0 перекрестным методом

Принцип. Одновременное определение агглютиногенов эритроцитов исследуемой крови с помощью стандартных сывороток и агглютининов исследуемой сыворотки с помощью стандартных эритроцитов.

Реагенты.

1. Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки 0(I)αβ, А(II)β и В(III)α групп двух разных серий каждой группы.

2. Стандартные эритроциты групп 0(I), А(II) и В(III).

3. Изотонический раствор хлорида натрия - 0,9% NaCl.

Специальное оснащение: белая пластинка со смачиваемой поверхностью, глазные пипетки, химические стаканчики, стеклянная палочка, вата, спирт, скарификаторы.

Подготовительная работа. Определение групп крови должно производиться при хорошем освещении и при температуре 15-25ºС. Флаконы со стандартными сыворотками ставят в специальный штатив в следующем порядке: слева – стандартные сыворотки 0(I) группы (одна сзади другой), в середине – стандартные сыворотки А(II) группы и справа – стандартные сыворотки В(III) группы. В каждый флакон со стандартной сывороткой опускают сухую чистую глазную пипетку. В штатив устанавливают пробирки или флаконы со стандартными эритроцитами в следующем порядке: слева группы 0(I), в середине – группы А(II) и справа – группы В(III). Для промывания стеклянных палочек в химический стаканчик наливают воду. В стаканчик с изотоническим раствором NaCl опускают глазную пипетку.

Техника определения. Кровь для исследования берут из вены или пальца в сухую пробирку. Кровь центрифугируют или оставляют стоять на 20-30 минут для отделения сыворотки. Для лучшего отделения сыворотки следует через 3-5 минут отделить сверток от стенок пробирки, обведя его стеклянной палочкой. Делают на пластинке обозначения стеклографом в соответствии с таблицей. В верхней части пластинки у соответствующих обозначений наносят по одной большой капле (0,1мл) стандартных изогемагглютинирующих сывороток I-III групп двух разных серий. В нижней части пластинки у соответствующих обозначений наносят по одной маленькой капле (0,01мл) стандартных эритроцитов I-III групп крови. Из пробирки с исследуемой кровью осторожно, чтобы не взболтать эритроциты, пипеткой отсасывают сыворотку и наносят её по одной большой капле (0,1мл) на капли стандартных эритроцитов. Со дна пробирки этой же пипеткой набирают эритроциты и наносят их по одной маленькой капле (0,01мл) рядом с каждой их 6 капель стандартных сывороток. Перемешивают стеклянной палочкой во всех 9 каплях сыворотку с эритроцитами. После перемешивания каждой капли палочку промывают в воде и насухо вытирают. Замечают время. В течение 3 минут периодически покачивают пластинку. Через 3 минуты в те капли, где наступила агглютинация, добавляют по 1 капле изотонического раствора NaCl и периодически покачивают пластинку еще в течение 2 минут. Через 5 минут после перемешивания капель оценивают результаты реакции.

Таблица 38

Оценка результатов определения групп крови перекрестным методом

Трактовка результатов. Реакция агглютинация в каждой капле может быть положительной или отрицательной. При положительной реакции, то есть при наличии агглютинации, в смеси появляются видимые на глаз красные зернышки склеенных эритроцитов. Сыворотка при этом полностью или частично обесцвечивается. При отрицательной реакции, то есть отсутствии агглютинации, жидкость остается равномерно окрашенной в красный цвет.

Результаты реакций, полученных при помощи стандартных сывороток и стандартных эритроцитов, должны совпадать, то есть указывать на содержание агглютиногенов и агглютининов, соответствующих одной и той же группе крови.

9.2. РЕЗУС-ПРИНАДЛЕЖНОСТЬ КРОВИ

Система антигенов эритроцитов Резус, вторая по активности после системы АВ0, открыта в 1940 году К. Ландштейнером и Винером. Свое название антиген получил от обезьяны Macacus Rhesus, у которой он был обнаружен. Резус-фактор содержится на эритроцитах, лейкоцитах, тромбоцитах, в разных органах и тканях, а также в тканевой жидкости и околоплодных водах человека. Образование антигена резус начинается с 8-10 недели эмбрионального развития.

В настоящее время система Резус насчитывает более 75 антигенов, пять из которых являются клинически значимыми: D, C, Е, е. Отсутствие антигена D обозначают буквой d. Самым сильным антигеном системы Резус является антиген D, который и подразумевается под термином «резус-фактор». Именно по наличию или отсутствию на эритроцитах антигена D кровь делится на резус-положительную (Rh+) и резус-отрицательную (rh-). Различные сочетания антигенов резус в крови отдельных людей составляют 28 групп (фенотипов), которые представляют собой набор антигенов резус – по одному от каждого родителя, (например, СсDеe, ССddЕе). Четырнадцать фенотипов содержат антиген D и являются резус – положительными, а другие 14 не содержат антигена D и их относят к резус – отрицательным. Однако такая оценка резус-принадлежности крови применяется лишь для реципиентов. Доноры же считаются rh(-), если у них на эритроцитах не содержится ни антиген D, ни антиген С, ни антиген Е, то есть при фенотипе ccddee. Это связано с тем, что, хотя антигены С и Е менее активны, чем D, к ним также могут вырабатываться антитела.

Количество резус-положительных и резус–отрицательных людей различается у представителей разных рас. У европеоидов, в том числе и в РФ, доля rh(-) лиц составляет в среднем 14-16%, в то время как среди монголоидов rh(-) фенотип встречается менее чем у 1% населения, и резус-конфликты у них чрезвычайно редки.

У 1-3% резус-положительных лиц на эритроцитах содержится слабый вариант антигена D (D u), который дает мелкую, сомнительную агглютинацию с антителами анти-D. В этих случаях резус-принадлежность крови реципиентов и беременных женщин оценивают как rh(-), а кровь доноров – как Rh (+).

Система Резус в отличие от системы АВ0 не имеет естественных антител. Антитела антирезус появляются только после иммунизации резус-отрицательного организма в результате переливания резус-положительной крови или беременности резус-положительным плодом. Антитела к резус-антигенам сохраняются несколько лет, иногда всю жизнь. В большинстве случаев титр антител со временем постепенно снижается, но при повторном попадании в организм резус-антигена резко (лавинообразно) возрастает.

Резус антитела различаются по специфичности (анти-D, анти-С, анти-Е и др.) и по серологическим свойствам (полные и неполные). Полные антитела вызывают агглютинацию эритроцитов в солевой среде при комнатной температуре, а неполные – при повышенной температуре и в коллоидной среде (при добавлении желатина, полиглюкина, сывороточного белка). Полные антитела (IgM) синтезируются в начале иммунной реакции и вскоре исчезают из крови. Неполные антитела (IgG) появляются позже и являются причиной развития гемолитической болезни новорожденных, так как проходят через плаценту и вызывают гемолиз эритроцитов плода.

Определение резус-принадлежности крови основанона реакции агглютинации эритроцитов исследуемой крови с антителами, содержащимися в реагентах антирезус. Реагенты антирезус делятся на 2 группы: с полными и неполными антителами. Реагенты, содержащие полные антитела класса IgM, дают реакцию агглютинации в солевой среде. К ним относятся цоликлоны анти-D супер, анти-С супер, анти-Е супер, стандартные сыворотки антирезус анти-D с полными антителами и др. Реагенты, содержащие неполные антитела класса IgG (цоликлон анти-D, стандартные универсальные реагенты антирезус анти-D, анти-DС, анти-DСЕ и т.д.), дают реакцию агглютинации только в коллоидной среде. В зависимости от формы содержащихся в реагенте антител определение резус-принадлежности крови проводится в разных условиях (в солевой или коллоидной среде, при комнатной температуре или при нагревании), поэтому к каждому реагенту прилагается инструкция по его использованию. В настоящее время предпочтение отдается моноклональным реагентам антирезус (цоликлонам). Для определения антигенов системы Резус используется также гелевая технология.

Определение резус-принадлежности крови при помощи цоликлона анти-D супер (анти-D IgM моноклонального реагента)

Принцип. А нтиген D исследуемых эритроцитов выявляют реакцией агглютинации в солевой среде с моноклональными антителами анти-D, содержащимися в цоликлоне анти-D супер.

Цоликлон анти-D супер изготовлен на основе культуральной жидкости клеточной гетерогибридомы, полученной в результате слияния человеческой лимфобластоидной линии и миеломной клеточной линией мыши. Реагент содержит моноклональные полные антитела анти-D класса IgM и не содержит антител иной специфичности, поэтому может быть использован для выявления антигена D в эритроцитах любой группы крови.

Реагенты : цоликлон анти-D супер; стандартные Rh(+) и rh(-) эритроциты – для контроля специфичности реакции.

Техника исследования. Определение антигена D с помощью цоликлона анти-D супер можно производить в консервированной крови, в крови, взятой без консерванта, а также в крови из пальца.

На пластину со смачиваемой поверхностью наносят большую каплю (около 0,1мл) цоликлона анти-D супер, а рядом - маленькую каплю (0,01-0,05мл) крови и смешивают кровь с реагентом стеклянной палочкой. Ждут 20-30 секунд, а затем периодически покачивают пластинку. Через 3 минуты оценивают результаты реакции.

Трактовка результатов. При наличии агглютинации кровь оценивается как резус-положительная, а при отсутствии агглютинации – как резус-отрицательная. Для контроля специфичности при каждом исследовании необходимо ставить реакцию со стандартными D-положительными и D-отрицательными эритроцитами. Результаты определения резус-принадлежности исследуемой крови учитывают как истинные только в том случае, если со стандартными резус-положительными эритроцитами реагент дал реакцию агглютинации, а со стандартными резус-отрицательными эритроцитами агглютинации нет.

Образцы крови, которые при исследовании цоликлоном анти-D супер дали отрицательный результат, необходимо дополнительно тестировать с помощью реагентов, содержащих неполные антитела IgG для выявления антигена D u (поликлональной сывороткой или моноклональным анти-D реагентом).

9.3. КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ К ГЛАВЕ «ГРУППЫ И РЕЗУС-ПРИНАДЛЕЖНОСТЬ КРОВИ»

1. Что означает понятие «Группа крови» в практической медицине и с позиций современной иммуногематологии?

2. Дайте характеристику групп крови системы АВ0.

3. Какими методами можно определить группу крови?

4. Какой принцип лежит в основе всех методов определения группы крови?

5. Какие реагенты используются для определения группы крови прямой реакцией?

6. Опишите результаты определения второй группы крови с помощью прямой реакции.

7. Почему перекрестный метод определения группы крови так называется?

8. Реагенты для перекрестного метода определения группы крови.

9. Результаты определения третьей группы крови перекрестным методом.

10. Что такое цоликлоны?

11. Результаты определения четвертой группы крови с цоликлонами.

12. Какие правила необходимо соблюдать при переливании эритроцитной массы и плазмы крови?

13. Какие антигены относятся к системе Резус?

14. В чем заключается различие между системами антигенов АВ0 и Резус?

15. Клиническое значение антигенов системы Резус.

16. По какому принципу кровь доноров и реципиентов относят к резус-положительной или резус-отрицательной?

17. Какие реагенты могут использоваться для определения резус-принадлежности крови?

18. Чем различаются цоликлоны анти-D и анти-D супер?

19. Что такое антиген D u ? Его клиническое значение.

20. Фенотип резус-отрицательного донора.